Oosit Maturasyonu Sürecinde Global DNA Metilasyonunun Değişimi

Amaç: Bu çalışmada, global DNA metilasyonunun Germinal Vezikül (GV) aşamasından Metafaz II (MII) aşamasına kadar olan oosit maturasyonu sürecinde değişim gösterip göstermediğinin ortaya konulması amaçlanmıştır. Yöntem: Bu çalışmada, 4 haftalık Balb/C farelerinin GV ve in vivo MII oosit evreleri arasındaki global DNA metilasyonu farkı immünofloresan yöntemi kullanılarak incelendi. Bu amaçla GV ve MII aşamasındaki oositlerde 5-metil sitozin (5mC) işaretlemesi sonrası Zeiss LSM-880 Airyscan konfokal mikroskopta alınan optik kesitlerinden elde edilen görüntülerden Image-J yazılımı kullanılarak hesaplanan sinyal yoğunlukları değerlendirildi. Bulgular: Global DNA metilasyonu, 5-metil sitozin (5mC) işaretlemesi sonrası değerlendirildiğinde, GV aşamasındaki oositlerde, çekirdek bölgesinde gözlemlenirken, MII aşamasındaki oositlerde metafaz plağına uygun lokasyonda, olduğu izlendi. Global DNA metilasyonunun göreceli sinyal yoğunluğu değerlendirildiğinde; MII aşamasında GV aşamasına göre 3,2 katlık istatistiki olarak anlamlı bir azalma olduğu saptandı. Bu azalışın birinci mayoz sonrası DNA miktarındaki azalmaya bağlı olup olmadığı için yapılan hesaplamalar da bunun sadece DNA miktarındaki azalmadan kaynaklanmadığını gösterdi. Sonuç: Oositlerde, GV aşamasına kıyasla MII evresinde global DNA metilasyon seviyesinin üç kattan daha fazla azalmış olması, fertilizasyon öncesi oositteki DNA metilasyonunun çeşitli mekanizmalarla kontrol edildiğini ve bunun fertilizasyon dinamiğinde önemli olabileceğini göstermiştir.