Etat de la résistance aux macrolides de Mycoplasma pneumoniae détecté dans des prélèvements respiratoires pédiatriques.

Introduction Les infections respiratoires à Mycoplasma pneumoniae (Mp) sont en forte augmentation depuis le mois d'octobre 2023 en Europe et en Asie du sud-est. Les macrolides constituent le traitement de première intention chez les enfants. Les niveaux de résistance aux macrolides sont très variables d'un pays à l'autre (de 3.6 % pour La France à 70% pour la Corée du Sud et plus de 90% pour certaines provinces de la Chine). Deux loci du gène de l'ARNr 23S : 2063, 2064 sont décrits comme associées à des niveaux élevés de résistance aux macrolides en cas de mutation. Les trois mutations A2063G, A2063T et A2064G couvriraient plus de 99% des mutations responsable de la résistance.Dans ce contexte d'augmentation globale de la résistance aux macrolides, ce travail a pour objectif d'évaluer la prévalence de la résistance chez les enfants admis dans un hôpital universitaire pédiatrique entre le 1er novembre 2023 et le 05 février 2024. Matériels et méthodes Les échantillons avec un résultat positif de PCR Mp et un cycle de quantification < 22 sur le panel respiratoire multiplex (PRM) Filmarray™, ont été sélectionnés afin de séquencer une portion du gène codant pour l'ARN ribosomal 23S, incluant les loci des hot spots de mutation en position 2063 et 2064. L'extraction d'ADN a été réalisée sur les échantillons nasopharyngés avec le BioRobot EZ1 et le kit EZ1 DNA tissue (Qiagen). L'amplification de la région d'intérêt de l'ARNr 23S a été réalisée avec la paire d'amorces : MP217-F (5′ AACTATAACGGTCCTAAGGTAGCG 3′) et MP 217-R (5′ GCTCACCTATTCTACATGAT 3′) amplifiant par PCR en temps réel un fragment de 217 pb comme décrit par Wolff et al en 2008. Le mélange PCR contenait 10 µL d'extrait ADN, 0,2 µM de chaque amorce et 25 µL de LightCycler 480 SYBR Green I Master (Roche) dans un volume final de 50 µL. L'amplification a été réalisée sur un thermocycleur LC480 (Roche), avec une étape initiale de 10 min à 95°C, suivie de 45 cycles de 15s à 95°C, 30s à 55°C, 30s à 72°C et une étape finale d'extension de 7 min à 72°C. Les amplicons de 217 bp englobant les positions 1917 à 2134 ont ensuite été séquencés par technique Sanger (Azenta) et alignées sur la séquence de référence X68422.1 à l'aide du logiciel Geneious R9. Résultats Entre novembre 2023 et janvier 2024, 191 prélèvements respiratoires sur 2049 (9%) ont été détectés positifs pour Mp par le PRM. Cent huit échantillons présentaient un Ct< 22. La portion de gène de l'ARNr23S de 217 bp a été amplifiées pour 95 prélèvements en quantité suffisante. Quatre-vingt-douze séquences présentant un chromatogramme de bonne qualité ont été obtenues. Parmi celles-ci : deux portaient la mutation A2063G. Soit une proportion de résistance de 2.17% (2/92). Aucune mutation sur le locus 2064 n'a été observée. Conclusion Ces résultats sont proches des données de résistance récentes communiquées par le CNR de Bordeaux, réalisés sur des échantillons obtenus en début d'épidémie et rapportant une proportion de mutations de 3.6 %, en population générale. La persistance d'un niveau de résistance inférieur à 5% est rassurante quant à la poursuite d'une utilisation des macrolides pour le traitement de première intention des infections respiratoires à Mp chez les enfants nécessitant une antibiothérapie.Aucun lien d'intérêt