共生培养法促进石杉碱甲增量富集的研究

为了促进蛇足石杉中石杉碱甲增量富集,本文利用内生真菌与蛇足石杉的共生进化关系,以共培养体系(co-culture system,CCS)为基础,提出了增加石杉碱甲产率的新方法.以蛇足石杉植株存活率为指标,确定共培养体系最佳培养条件;以细胞存活率、愈伤组织诱导率和增殖率为指标,确定最佳培养基条件;以石杉碱甲和麦角甾醇为指标性成分,控制植物细胞和内生真菌比例关系,维持培养体系内植物细胞和内生真菌之间的生长平衡,获得最佳的继代时间.结果表明:CCS的最佳培养条件为光照强度100 Lux,湿度95％,MS液体培养基,蔗糖20.0 g/L,2,4-二氯苯氧基乙酸5.0mg/L和激动素1.0mg/L;4 d为最佳继代时间,其石杉碱甲的浓度最高,与1 d时相比增加了 49.34％,并且石杉碱甲与麦角甾醇的浓度比值控制在1.5～2.2之间时,内生真菌生长对石杉碱甲的富集有良性促进作用.该研究为高效、低成本增加石杉碱甲产量提供新的探索路径,亦可以有效解决药源不足问题,具有很好的应用前景.