鸭源新型鹅细小病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及应用

新型鹅细小病毒(novel goose parvovirus,NGPV)是由鹅细小病毒(goose parvovirus,GPV)变异而来,可感染雏鸭,引起以鸭短喙侏儒综合征为主要特征的传染性疾病.2015年该病在我国鸭群中大暴发,严重影响鸭出栏率,给我国的养殖行业带来巨大的经济损失.为建立一种鸭源NGPV抗体的间接ELISA检测方法,用于鸭感染细小病毒的血清学检测和鸭免疫细小病毒疫苗后抗体水平监测,本研究利用生物信息学预测了 NGPV YICH株的结构蛋白VP3的抗原表位,选择了抗原富集区域(aa250～525)进行原核表达,经蛋白纯化获得了可溶性的VP3截短蛋白VP3-tr.以VP3-tr为包被抗原,经过棋盘滴定方法优化各个反应条件,建立了 NGPV抗体的间接ELISA检测方法.利用优化后的间接ELISA方法对30份GPV阴性鸭血清进行检测,确定阴阳性临界值为0.219.ELISA方法的灵敏性、特异性和重复性检测结果表明,该方法灵敏度较高,特异性良好,不与鸭坦布苏病毒、新城疫病毒、禽流感病毒、鸭疫里默杆菌、大肠杆菌病原阳性血清发生交叉反应;批内和批间重复试验的变异系数均小于6％,重复性良好.用该方法与Western blot检测方法分别对147份临床血清样品进行检测,结果表明ELISA检测阳性率为85.0％,Western blot检测率为69.4％,两者符合率为84.4％.综上所述,本研究成功建立了鸭源NGPV抗体的间接ELISA检测方法,为鸭感染NGPV后的感染情况监测以及疫苗免疫评估提供了更简便可靠的方法.