基于液相色谱-同位素稀释质谱法测定氨基酸的蛋白质定量方法

为定量分析蛋白质,建立蛋白质水解液中氨基酸的液相色谱-同位素稀释质谱分析方法.蛋白质在6 mol/L盐酸溶液存在下 130℃水解,经Hypercarb多孔石墨碳色谱柱、0.1%全氟戊酸水溶液/乙腈流动相体系分离,选择脯氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸5种较为稳定的氨基酸,以其相应的稳定同位素标记物为内标括号法定量,结合蛋白质的氨基酸序列信息实现对蛋白质的绝对定量.结果表明,5种氨基酸在 10～1 000 ng/mL范围内线性关系良好(R2＞0.995),检出限和定量限分别在 0.02～0.07 ng/mL和0.06～0.2 ng/mL之间,3个不同质量水平下经水解处理的回收率在 97.0%～102.4%之间、相对标准偏差在1.1%～3.0%之间.对新型冠状病毒(新冠病毒)N蛋白人源IgG单克隆抗体有证标准物质的分析结果和新冠病毒N蛋白国家计量比对的测量结果满意,证明该方法具有足够的准确度.