基于iap基因的RT-LAMP技术检测肉类食品中单核细胞增生李斯特菌的效果评价

作者旨在探讨逆转录环介导等温扩增(reverse transcription-loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)技术在检测单核细胞增生李斯特菌感染的肉类食品中的效果评价.根据RT-LAMP原理,以iap基因为靶基因设计引物,检测肉制品中的单核细胞增生李斯特菌,并将该方法的特异性、灵敏度、死菌活菌鉴别效果与国标进行对比.实验获得的RT-LAMP体系最佳参数为63 ℃扩增60 min,反应体系中引物的最佳浓度为外引物0.4 μmol/L和内引物0.8μmol/L,以及 MgSO4 2.0 mmol/L、甜菜碱 1.0 mol/L、dNTPs 2.0 mmol/L、AMV 逆转录酶 10 U/μL、Bst DNA聚合酶320 U/mL.该实验的灵敏度为每管7.3×101 CFU,是LAMP的2倍.特异性实验显示该方法仅检测单增李斯特菌的靶基因,无假阳性.用RT-LAMP和中国国家标准GB 4789.30-2016检测市售肉样品(n=100)中单核细胞增生李斯特菌的能力相似,且RT-LAMP仅对活菌有扩增作用.死菌活菌鉴别实验显示该法可以排除肉样中死菌的干扰.经与国标方法做对比,可知RT-LAMP可作为一种有效的检测手段.