烟草香气相关基因CRISPR/Cas9 编辑突变体库的构建

为探究CRISPR/Cas9 基因编辑技术构建烟草突变体库的可行性，该研究筛选了100 个可能 参与烟草香气代谢的基因，设计相应的100 个sgRNA 并构建了由100 个CRISPR/Cas9 编辑载体组 成的质粒库，获得转基因材料后分析了载体的共转化率、靶向编辑效率和脱靶编辑情况。结果表明： （1）通过农杆菌介导100 个sgRNA 的共转化后，在172 个阳性转化株中检测到了其中的77 个sgRNA， 共转化效率为77%；（2）在77 个携带sgRNA 的转基因后代中，69 个sgRNA 对目标基因进行了靶 向编辑，编辑效率为89.9%；（3）脱靶位点测序检测发现，只有一个sgRNA 在非目标靶位点产生 了脱靶编辑，表明CRISPR/Cas9 基因编辑技术在烟草中的脱靶概率非常低。综上所述，利用 CRISPR/Cas9 载体库共转化对烟草基因进行高通量靶向编辑以构建突变体库的方法是切实可行，且 该方法有共转化效率高、编辑效率高和脱靶编辑概率低等特点。