小檗胺影响牛病毒性腹泻病毒体外复制的研究

本研究旨在研究天然小分子药物小檗胺(BBM)是否影响牛病毒性腹泻病毒(BVDV)体外复制.分别配制0、1、5、8、10、15、20μmol/L浓度的BBM,使用MTT法检测BBM对MDBK细胞增殖的影响;并选择抑制作用相对较小浓度的BBM处理牛肾细胞(MDBK)8h后感染BVDV,使用免疫荧光技术检测BVDV双链RNA(dsRNA)含量,确定最佳用药浓度;分别使用实时荧光定量PCR、Reed-Muench法、倒置显微镜观察来检测BBM对BVDVRNA复制、病毒滴度变化、致细胞病变效应(CPE)的影响.结果显示:10 μmol/LBBM对BVDV dsRNA积累具有显著性抑制作用,同时该浓度对MDBK细胞的毒性作用较小;同时采取荧光定量PCR检测和滴度测定,发现在72 h内BVDV感染BBM处理的MDBK细胞与对照相比,5'UTR mRNA水平和子代病毒滴度显著性降低,在BVDV感染24h和36h时,子代病毒滴度差异性最大;BVDV感染对照组处理的MBDK细胞会造成严重的CPE现象,而BVDV感染BBM处理的细胞CPE现象较弱.以上结果表明,本研究初步验证BBM显著抑制BVDV在细胞中的复制.