利用小泛素蛋白修饰分子融合技术在大肠杆菌BL21(DE3)中表达重组抗菌肽LLv

为了研究在大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)中利用小分子泛素蛋白(small ubiquitin-like modifier,SUMO)融合技术表达重组抗菌肽LLv(antimicrobial peptide LLv)的方法.试验以天然抗菌肽LL-37 氨基酸组成及分子结构为依据,人工设计了 LLv的氨基酸序列和基因序列.利用 SUMO 融合技术,构建重组大肠杆菌表达载体 pSU-MO-LLv在E.coli BL21(DE3)中表达SUMO-LLv,并研究异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl beta-D-thiogalacyrano-side,IPTG)浓度和诱导时间对融合蛋白 SUMO-LLv表达的影响,同时分析融合蛋白 SUMO-LLv表达的可溶性并分离纯化目的蛋白 LLv.结果表明:建立的E.coli BL21(DE3)的 pSUMO-LLv重组表达载体,经 DNA测序验证构建正确;SUMO-LLv的诱导表达最佳条件是 IPTG 浓度 0.5 mmol/L,诱导表达时间为 2 h;融合蛋白 SUMO-LLv主要存在于菌液上清液中,表达含量为 11.34 μg/mL;免疫印迹试验(Western blot)鉴定证明融合蛋白具有良好的反应原性;采用 Ni柱亲和层析法在诱导菌液中成功纯化到了目的蛋白 LLv,大小为 5 kDa.说明在E.coli BL21(DE3)中利用 SUMO 融合技术表达重组抗菌肽 LLv的方法可行.