异藤黄酚对急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的 探讨异藤黄酚(ISO)对急性淋巴细胞白血病(ALL)Jurkat细胞增殖和凋亡的影响及机制.方法 人ALL Jurkat细胞和人正常肝细胞HL-7702 分别培养至对数生长期,0[二甲基亚砜(DMSO)]、10、15、20及25 μmol/L ISO处理2 种细胞,采用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞处理后24、48 及72h的光密度(OD)并计算细胞存活率;取对数生长期Jurkat细胞,分别用0(DMSO)、10、15 及20 μmol/L ISO处理,采用流式细胞术检测各浓度ISO组Jurkat细胞24、48 h的凋亡率,采用Hoechst 33258 染色法验证各浓度ISO组Jurkat细胞24h的凋亡率,采用线粒体膜电位(MMP)检测试剂盒(JC-1)检测各浓度ISO组Jurkat细胞24h的MMP,采用RNA高通量测序(RNA-seq)分析ISO组Jurkat细胞24h的细胞内基因转录水平,采用Western blot检测各浓度ISO组Jurkat细胞24h时凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 9(Caspase9)、剪切的Caspase3(Cleaved-caspase3)、剪切的Caspase9(Cleaved-caspase9)、凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)、细胞色素C(Cytc)、蛋白激酶B(Akt)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、重组人BH3 结构域凋亡诱导蛋白(Bid)、截断的 Bid(t-Bid)、磷酸化的信号转导和转录激活因子-3(p-STAT3)、Janus 激酶 2(JAK2)、磷酸化JAK2(p-JAK2)、多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)、剪切的PARP(Cleaved-PARP)、丝裂原活化蛋白激酶p38(p38)蛋白的表达.结果 MTT检测结果显示,与DMSO组相比,10、15、20 及25 μmol/L ISO组Jurkat细胞活力下降(P＜0.05),且具有时间依赖性;流式细胞术结果显示,与DMSO组相比,10、15 及 20 μmol/L ISO组Jurkat细胞凋亡率升高(P＜0.05),且具有时间依赖性;Western blot结果显示,与DMSO组相比,10、15 及 20 μmol/L ISO处理Jurkat细胞24h后,Cleaved-caspase3、Cleaved-caspase9、Cleaved-PARP、t-Bid、Apaf-1 及Cytc的表达上调(P＜0.05),p-JAK2、p-STAT3 及c-Myc的表达下调(P＜0.05);RNAseq分析结果,与DMSO组相比,15 μmol/L ISO处理Jurkat细胞24h后,299 个基因上调、57 个基因下调,且主要影响了Jurkat细胞中MAPK及PI3K/Akt等信号途径,进一步细胞实验结果表明,与DMSO组相比,10、15 及20 μmol/L ISO组Jurkat细胞中p-p38 的表达上调(P＜0.05),p-PI3K、p-Akt的表达下调(P＜0.05).结论 ISO可抑制Jurkat细胞增殖、诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制JAK2/STAT3/c-Myc、PI3K/Akt信号通路及激活p38 MAPK信号通路有关.