健脾清化化瘀汤对幽门螺杆菌相关胃癌前病变大鼠胃黏膜miR-21、PTEN表达的影响

目的 探讨健脾清化化瘀汤治疗胃癌前病变的可能作用机制.方法 将 90 只健康清洁级雄性SD大鼠按照随机数字表法随机分为 6 组,包括正常组、模型组、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)抑制剂组、健脾清化化瘀汤低剂量组、健脾清化化瘀汤中剂量组、健脾清化化瘀汤高剂量组.除正常组外,其余 5 组大鼠均用 1×109 CFU/mL 幽门螺杆菌(helicobacter pylori,HP)菌液灌胃7 次,平均2 次/周.确认HP感染后,除正常组外,其余 5 组均予150 μg/mL甲基-N-硝基-N亚硝基胍(MNNG)溶液灌胃,频率 5 次/周,同时予 100 μg/mL MNNG溶液自由饮用,配合0.03%雷尼替丁饲料喂养、饥饱失常法(2 天足量饲料喂养,1 天禁食),持续造模28 周.造模成功后,健脾清化化瘀汤低、中、高剂量组分别给予相应剂量健脾清化化瘀汤灌胃,iNOS抑制剂组给予氨基胍溶液50 mg/(kg·d)剂量进行灌胃,正常组及模型组予以生理盐水进行灌胃,均1 次/天,干预治疗10 周.干预结束后,运用苏木精—伊红染色观察大鼠胃黏膜病理变化;运用免疫组化法检测胃组织磷酸酯酶与张力蛋白同源物(phosphate and tension homology deleted on chromosome ten,PTEN)蛋白表达;运用RT-PCR法检测胃组织miR-21、PTEN mRNA 表达.结果 与正常组比较,模型组大鼠胃黏膜可见腺体萎缩、肠化、异型增生,健脾清化化瘀汤中、高剂量组及iNOS抑制剂组较模型组有不同程度的改善,健脾清化化瘀汤低剂量组改善不明显.各组大鼠胃黏膜miR-21、PTEN mRNA、PTEN蛋白表达差异均有统计学意义(P＜0.01).与空白组比较,模型组miR-21 表达显著升高(P＜0.01),PTEN mRNA、蛋白表达显著下调(P＜0.01;P＜0.01);与模型组比较,健脾清化化瘀汤中、高剂量组、iNOS抑制剂组miR-21 表达下调(均P＜0.01),PTEN mRNA、蛋白表达升高(P＜0.05;P＜0.01),健脾清化化瘀汤低剂量组miR-21、PTEN mRNA、蛋白表达较模型组差异均无统计学意义.结论 健脾清化化瘀汤可能通过下调胃黏膜miR-21 的表达,解除miR-21 对PTEN表达的抑制,进一步激活PTEN下游信号通路,从而缓解胃黏膜病变,阻断胃癌前病变向胃癌进展.