WalK(S221P)突变促进金黄色葡萄球菌荚膜产生的作用研究

目的 探究WalK(S221P)突变促进金葡菌荚膜产生的作用及可能机制.方法 采用转录组测序(RNA-seq)分析WalK(S221P)突变对金葡菌基因表达的影响,采用RT-qPCR检测荚膜合成基因的表达变化.利用荚膜染色和透射电镜观察确认WalK(S221P)突变促进金葡菌荚膜产生的作用,再用RT-qPCR筛选参与介导WalK(S221P)促进荚膜合成的调控分子,通过结合位点分析和凝胶迁移阻滞实验(EMSA)证实WalKR对目标分子的调控作用.结果 RNA-seq分析显示WalK(S221P)突变对196 个金葡菌基因的表达水平影响显著,其中 16 个荚膜合成操纵子基因在XN108 中的表达均显著上调.RT-qPCR检测显示荚膜合成相关 capA,capH和 capK在含有 WalK(S221P)突变的 XN108 及K-Newman菌株中分别较回复株XN108-R和野生型Newman菌株显著上调.荚膜染色和透射电镜观察显示XN108 的荚膜合成相比于回复株XN108-R明显增多,增厚.RT-qPCR筛选提示WalK(S221P)促进金葡菌荚膜合成可能是通过上调MgrA表达水平实现的,结合位点检索分析及EMSA实验证实WalK激活的WalR具有直接结合mgrA基因调控区的功能.结论 金葡菌WalK(S221P)突变具有促进金葡菌荚膜产生的作用,该作用的发挥可能通过上调MgrA的表达而实现.