加味人参乌梅汤调控腹泻大鼠GABA能信号通路的系统效应

目的:研究加味人参乌梅汤对腹泻模型大鼠结肠组织中γ-氨基丁酸(GABA)能信号通路相关调控因子的影响,进一步揭示加味人参乌梅汤益气生津止泻的作用机制.方法:从48只SD幼龄大鼠中随机抽取12只作为正常组,其余大鼠以番泻叶泻下、劳倦力竭及饮食失宜等复合因素造模14 d.造模成功后,随机分为模型组、西药组及中药组,每组12只.正常组与模型组给予生理盐水灌胃(20 mL·kg-1),西药组给予妈咪爱灌胃(0.7g·kg-1),中药组给予加味人参乌梅汤灌胃(35g·kg-1),均1次/d,连续干预7d.每日观测记录大鼠一般情况、稀便率及腹泻指数.获取大鼠结肠标本,采用免疫组化法(IHC)检测大鼠结肠GABA蛋白积分吸光度表达;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B2(Akt2)、磷酸化(p-)Akt及白细胞介素-1β(IL-1β)的含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠结肠PI3K、Akt2及γ-氨基丁酸A型受体β2亚基(GABRB2)mRNA和蛋白的表达水平.结果:与正常组比较,模型组大鼠一般情况明显变差,稀便率及腹泻指数差异无统计学意义,GABA蛋白表达明显升高(P＜0.05),PI3K、Akt2、p-Akt及IL-lβ表达含量明显升高(P＜0.05,P＜0.01),PI3K、Akt2、GABRB2 mRNA及蛋白表达均极显著升高(P＜0.01).与模型组比较,中药组、西药组大鼠一般情况明显好转,稀便率及腹泻指数显著下调(P＜0.01),中药组、西药组PI3K、Akt2、p-Akt及IL-1β含量均明显下调(P＜0.05),中药组PI3K、Akt2、GABRB2 mRNA均明显下调(P＜0.05,P＜0.01),GABA、PI3K及GABRB2蛋白表达明显下调(P＜0.05,P＜0.01);西药组PI3K及Akt2mRNA和PI3K蛋白表达均明显下降(P＜0.05).结论:加味人参乌梅汤能通过调节腹泻大鼠结肠GABA能信号通路,减少肠上皮细胞中Cl-向肠腔流动,改善腹泻模型大鼠结肠水液代谢失衡状态,进而发挥其益气生津止泻效应.