利胆合剂抑制钙敏感受体介导的肝细胞凋亡改善幼龄大鼠肝内胆汁淤积研究

目的:研究钙敏感受体(CaSR)在胆汁淤积幼龄大鼠模型中的表达及利胆合剂的干预作用.方法:将40只SD幼龄大鼠随机分为正常组、模型组、熊去氧胆酸(UDCA)组、利胆合剂组.正常组和模型组灌胃0.9％氯化钠溶液(10 mL·kg-1·d-1)6 d,UDCA组和利胆合剂组分别灌胃UDCA(60 mg·kg-1·d-1)和利胆合剂(40 g·kg-1·d-1)6 d.除正常组外,其余各组在第5天给予α-异硫氰酸奈酯(ANIT)50 mg·kg-1·d-1灌胃1次建立肝内胆汁淤积模型.ANIT灌胃后48h处死各组大鼠,采集标本.采用酶比色法检测TBIL、DBIL、TBA、ALP、γ-GT、ALT、AST;采用HE染色在光镜下观察各组肝脏组织病理学的变化;TUNEL检测肝组织的细胞凋亡情况;Western Blot检测肝组织CaSR及Bax、Bcl-2、Cytochrome-C、Cleaved caspase-3、Caspase-8、p-ERK、ERK、P38、p-P38、JNK、p-JNK表达.结果:模型组大鼠TBIL、DBIL、TBA、ALP、γ-GT、ALT、AST水平均较正常组显著升高(P＜0.01);UDCA组、利胆合剂组此7项指标水平均较模型组显著降低(P＜0.01),且利胆合剂组低于UDCA组(P＜0.05,P＜0.01).UDCA组、利胆合剂组肝脏病理、肝细胞凋亡较模型组有明显改善,而利胆合剂组改善最为明显.模型组CaSR、Bax、Cytochrome-C、Cleaved caspase-3、Caspase-8、p-P38和p-JNK水平较正常组显著增加(P＜0.01),Bcl-2和p-ERK水平显著降低(P＜0.01);UDCA组、利胆合剂组CaSR、Bax、Cytochrome-C、Cleaved caspase-3、Caspase-8、p-P38和p-JNK水平较模型组显著降低(P＜0.01),Bcl-2和p-ERK水平显著升高(P＜0.01);利胆合剂组CaSR、Bax、Cleaved caspase-3、Caspase-8、p-JNK水平较UDCA组显著降低(P＜0.01,P＜0.05).结论:利胆合剂可缓解ANIT诱导的胆汁淤积幼龄大鼠的胆汁淤积及肝损伤程度,保护肝细胞,疗效优于UDCA,其作用机制可能是通过线粒体途径和MAPK途径抑制CaSR介导的肝细胞凋亡.