基于"脑-肠轴"线粒体未折叠蛋白反应研究济川煎对慢传输型便秘的作用机制
Chinese Journal of Integrated Traditional and Western Medicine(2022)
Abstract
目的 观察济川煎对慢传输型便秘(STC)大鼠海马神经元与结肠细胞线粒体未折叠蛋白反应(UPRmt)水平的影响,结合"脑-肠轴"探讨补肾益精法治疗STC的作用机制.方法 60只清洁级SD大鼠按随机数字法抽取10只为空白组,余采用复方地芬诺酯(15 mg/kg,1次/日)灌胃6周复制STC模型,造模成功后大鼠分为:模型组、济川煎低、中、高剂量组、阳性药物组各10只.造模成功后空白组、模型组采用生理盐水等体积灌胃,济川煎低(8.64 g/kg,1次/日)、中(17.28 g/kg,1次/日)、高(34.56 g/kg,1次/日)剂量组、阳性药物组(莫沙必利1.54 mg/kg,1次/日)予以相应药物灌胃2周.观察各组大鼠首粒黑便排出时间;取结肠组织HE、AB-PAS染色观察病理学变化;取海马组织尼氏染色观察尼氏小体变化;采用实时聚合酶链式反应(RT-PCR)、免疫荧光法以及Western Blot检测结肠、海马组织中HSP60、CLpP、CHOP、LON mRNA及蛋白表达水平.结果 与空白组比较,模型组大鼠首粒黑便排出时间延长(P<0.01),结肠组织肌层纤维断裂,肌细胞核固缩、深染,结缔组织疏松,黏膜杯状细胞萎缩,管腔内黏液大量减少,海马组织中神经元数量减少,结肠组织与海马组织中HSP60、CLpP、CHOP、LON mRNA相对表达与蛋白表达均显著升高(P<0.01);与模型组比较,各治疗组结肠组织肌层纤维断裂、坏死减轻,结缔组织紧密,胞核饱满且无固缩,黏膜杯状细胞及黏液分泌有不同程度恢复,海马组织中神经元数量明显增多.各给药组结肠组织中HSP60、CLpP、CHOP和LON mRNA相对表达显著降低(P<0.01);海马组织中HSP60、CLpP、CHOP和LON mRNA相对表达有不同程度的降低(P<0.01,P<0.05);结肠组织中HSP60、CLpP、CHOP和LON蛋白表达均显著降低(P<0.01).结论 济川煎治疗STC的作用机制可能与调控结肠细胞、海马神经元的UPRmt以改善线粒体功能,通过脑肠同治减轻结肠细胞的凋亡与衰老,修复肠道肠道平滑肌细胞损伤,维持其对肠道动力的调节作用有关.
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