产顺式-4-L-羟脯氨酸工程菌的构建及转化条件的优化

目的构建产顺式-4-L-羟脯氨酸(cis-4-Hyp)的工程菌并优化其转化条件。 方法通过调整大肠杆菌的密码子偏好性以及mRNA二级结构对顺式-4-L-脯氨酸羟化酶(cis-P4H)基因进行优化，构建该基因的表达菌株。采用Ni-NTA亲和层析柱分离纯化cis-P4H，测定cis-P4H的酶活和稳定性。然后采用全细胞催化法制备cis-4-Hyp，通过单因素试验和正交试验对相关的转化条件进行优化。 结果构建了一株产cis-4-Hyp的工程菌，cis-P4H的比活为2.65 U/mg，半衰期为2.32 h。经过条件优化后，采用OD600为0.9时加入IPTG获得的工程菌菌体构建转化体系，在转化体系pH 6.5，转化温度为31 ℃，转化时间为60 h时，L-脯氨酸转化率最高达到83.33%。 结论研究获得的工程菌及转化条件具有良好的工业应用前景。