元宝枫 SSR-PCR 反应体系优化及引物筛选

本研究采用改良的 CTAB 法提取元宝枫基因组 DNA ，并使用 L 16 (4 5 ) 正交试验设计。通过 5 因素 4 水平实验，筛选 Taq DNA 聚合酶、 dNTPs 、引物浓度、 Mg 2+ 、模板 DNA 浓度及其用量，建立并优化元宝枫 ( Acer truncatum ) 的最佳 SSR-PCR 反应体系，即总体积 20 μ L ， Taq DNA 聚合酶、 dNTPs 、引物、 Mg 2+ 和模板 DNA 浓度分别为 1 U/20 μL 、 0.2 mmol/L 、 0.6 mmol/L 、 1.25 mmol/L 和 75 ng/20 μL 。扩增实验结果表明，该反应体系稳定性较好，可重复性高，具有较好的分辨率。可从 59 对引物中筛选出 14 对适用于元宝枫并具有较明显的多态性的 SSR 引物，为进一步研究元宝枫的分子标记辅助育种、 SSR 遗传多样性分析和遗传图谱构建提供了良好的基础。