西番莲科龙珠果 ISSR-PCR体系的建立和优化

为了获得适于龙珠果 ISSR-PCR 的反应体系，本研究以龙珠果叶片为试验材料，提取基因组 DNA ，采用 L 16 (4 5 ) 正交设计试验，对影响龙珠果 ISSR-PCR 扩增结果的 Mg 2 + 浓度、 dNTPs 浓度、 Taq DNA 聚合酶用量、引物浓度和模板 DNA 量进行优化，并筛选了最适退火温度。试验结果分析表明，各因素影响显著性为 dNTPs 浓度 > Taq DNA 聚合酶用量 > Mg 2 + 浓度 > 模板 DNA 量 > 引物浓度。在 20 μ L 反应体系中， dNTPs 浓度 0.2 mmol/L 、 Taq DNA 聚合酶 0.5 U 、 Mg 2 + 浓度 2.0 mmol/L 、模板 DNA 25 ng 、引物浓度 0.4 μ mol/L 为最佳用量。实验从 100 条 UBC 引物中筛选得到 22 条多态性较好的引物。本研究为龙珠果 ISSR 标记开发、种质资源鉴定、遗传多样性分析和分子标记辅助选择育种等提供科学依据。