马铃薯海藻糖酶基因人工 miRNA 载体的构建

Microcosmic (miRNAs) 是一类具有调控功能的内源性单链非编码小分子 RNA ，通过在转录后水平与靶基因互补结合来调控靶基因的表达。海藻糖是一种广泛存在于植物体内的渗透调节性物质，其在植物响应干旱胁迫中发挥着非常重要的作用。本研究利用人工 miRNA 技术 (artificial microRNA, amiRNA) 设计特异性沉默马铃薯海藻糖基因 ( StTRE ) 的人工 miRNA (amiR-StTRE) ，并利用巢式 PCR 技术克隆得到包含 amiRTRE 前体序列的 701 bp 目的片段。然后将获得的 DNA 片段 (701 bp) 与表达载体 pCPB121 通过双酶切和质粒重组法构建 StTRE 基因 amiRNA 表达载体 (pCPB121 - amiR- StTRE ) ，并经过双酶切图谱分析和测序检测，成功构建了表达载体 pCPB121 - amiR- StTRE 。以期有目的地利用 amiRNA 进行马铃薯的抗旱性遗传改良提供分子理论依据。