桔小实蝇钠离子通道基因和 P450 基因 RNAi 载体构建及转化

桔小实蝇是重要的柑橘害虫，目前已对多种杀虫剂产生不同程度的抗性，化学防治方法往往效果不理想，近年来植物转基因抗虫育种技术表现出巨大的潜力，这为更好地防治桔小实蝇提供了新思路。本研究为获得桔小实蝇抗性转基因柑橘，对桔小实蝇细胞色素 P450 基因 (cytochrome P450 monoxygenases, P450 ) 和电压门控钠离子通道基因 (sodium channel, SC ) 进行核苷酸序列比对，分别克隆得到片段大小为 590 bp 和 550 bp 的 P450 基因和 SC 基因的正反目标片段，利用植物表达载体 pFGC5941 ，将基因正反向片段与 Intron 两端连接，成功构建 RNA 干扰 (RNAi) 载体“ pFGC- P1F1R1 / P2F2 ”和“ pFGC- C1R1 / C2R2 ”。本研究利用 Xho 玉 - Nco 玉 、 Xba 玉 - Bam H 玉 酶切位点对质粒和载体进行双酶切分析实验，克隆测序得到大小为 590 bp 和 550 bp 的两个酶切片段，经核苷酸序列比对分析，验证其与插入片段一致，说明 RNAi 载体构建成功。通过农杆菌遗传转化体系，将外源重组载体整合到柑橘基因组中，经除草剂筛选、 PCR 检测分别得到 12 株转 P450 基因阳性苗和 9 株转钠离子通道基因阳性苗，这为后期柑橘抗桔小实蝇效果评价提供了实验材料。