Comparação da pcr em tempo real e isolamento microbiológico no diagnóstico da tuberculose bovina

A tuberculose bovina e uma doenca de importância economica e zoonotica, causada por agentes bacterianos do complexo Mycobacterium tuberculosis , cuja principal especie causadora e M. bovis. A qualidade dos testes de diagnostico para deteccao de animais com tuberculose sempre foi um desafio para o controle da infeccao. Nas atividades de inspecao, as lesoes identificadas no exame post-mortem sao analisadas pelo exame bacteriologico. A principal limitacao do teste esta relacionada ao tempo necessario para confirmacao do diagnostico, que pode variar entre 4 e 6 semanas. Na tentativa de aumentar a sensibilidade diagnostica os ensaios de PCR sao considerados um avanco no diagnostico rapido da tuberculose. A sensibilidade e ainda aumentada se utilizada a PCR em tempo real, por garantir uma melhor precisao, reprodutibilidade e controle de qualidade no processo. O objetivo deste estudo foi comparar a eficiencia da qPCR e do isolamento microbiologico no diagnostico da tuberculose bovina. Foram avaliadas 50 amostras de visceras, obtidas de bovinos abatidos em frigorificos sob fiscalizacao federal, provenientes de 26 municipios da regiao do Triângulo Mineiro e Alto Paranaiba, estado de Minas Gerais. A extracao do DNA foi realizada com o kit comercial DNeasy Blood & Tissue kit (Qiagen, Germany). As amostras de DNA extraido foram submetidas a qPCR no termociclador QuantStudio 7 Flex™ Real-Time PCR System (Life Technologies, USA). Os primers e probes utilizados na qPCR tinham como alvo o gene que codifica a regiao de diferenca 4 (RD4) e do elemento de insercao IS1081. As amostras consideradas positivas foram aquelas que amplificaram em um Cq menor ou igual a 42. O controle positivo utilizado foi o DNA da estirpe de referencia de M. bovis AN5. Para o isolamento bacteriano as amostras foram inicialmente descontaminadas pelo metodo classico de Petroff, e em seguida cultivadas em meio Stonebrink sob microaerofilia. As colonias isoladas foram identificadas pelo metodo da PCR utilizando os primers JB21 e JB22. Das 100 amostras avaliadas pela qPCR, em100% foi identificado o DNA de M. bovis , enquanto que das amostras submetidas ao isolamento bacteriano, 18% (9/50) foram consideradas positivas para M. bovis. Assim, os resultados indicam que a qPCR foi mais eficiente do que o isolamento bacteriano em meio Stonebrink, no diagnostico da tuberculose bovina a partir de fragmentos de visceras.