永生化猪乳腺上皮细胞系的建立

猪乳腺上皮细胞(porcine mammary epithelial cells,PMECs)在体外培养条件下依然具有高度分化的特性,可以维持其特有的形态特征及合成和分泌乳蛋白的功能.因此,建立可以维持猪乳腺上皮细胞特性的稳定的永生化细胞系对猪乳腺发育、分化及泌乳机制研究有着重要意义.本研究采用组织块培养法和酶消化法分离纯化妊娠末期母猪(Sus scrofa)乳腺上皮细胞,并对细胞培养方法进行优化.将人端粒酶逆转录酶基因(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)电转染导入原代培养的猪乳腺上皮细胞,通过PCR检测获得永生化猪乳腺上皮细胞系hTERT-PMECs.对连续传代培养60代的hTERT-PMECs进行细胞形态学观察,初步证明永生化后细胞类型没有发生改变;免疫荧光细胞染色结果表明,hTERT-PMECs可表达角蛋白;经催乳素、氢化可的松和胰岛素-转铁蛋白-硒(Insulin-Transferrin-Selenium,ITS)的诱导,反转录-PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)鉴定结果显示,hTERT-PMECs仍具有分泌乳蛋白的功能.综上所述,本研究成功获得了永生化的猪乳腺上皮细胞系hTERT-PMECs,且永生化细胞维持了与原代细胞相同的特性.本研究为猪乳腺发育以及泌乳机制的研究提供了基础资料.