基于重组酶介导等温扩增技术检测人腺病毒4型方法的建立与评价

目的 基于重组酶介导等温扩增技术(RAA)拟建立一种简单快速的人腺病毒 4 型(HAdV-4)检测方法.方法 以HAdV-4的六邻体(Hexon)基因为靶标设计特异性引物与探针,利用构建的阳性质粒标准品,在 39℃、40℃、42℃条件下进行重组酶介导等温扩增,选出最佳反应温度,并对该方法进行灵敏度、重复性及特异性检测.使用实时荧光RAA测定法检测 100 份临床样本,并与实时荧光PCR检测结果进行比较,评估HAdV-4 实时荧光RAA测定法在临床样本中的检测性能.结果 最终确定了实时荧光RAA扩增最适温度为 42℃,该方法检测限为101 copies/μL.当质粒标准品浓度为101～104 copies/μL时,批内的变异系数均<5%,重复性良好.特异性检测结果显示,该方法可以准确检测HAdV-4而不与其他亚型和其他病原体发生交叉反应.100 例临床样本分别使用实时荧光PCR和实时荧光RAA测定法进行检测,两种方法的符合率为 100%.结论 本研究开发了一种特异且简便的HAdV-4快速检测方法.