异泽兰黄素通过改善腹侧海马GABAa受体传递缓解大鼠酒精戒断焦虑样行为

目的:研究异泽兰黄素(Eupatilin,Eptl)对大鼠酒精戒断(Ethanol withdrawal,EtOHWI)焦虑样行为的改善作用及其与腹侧海马(Ventral hippocampus,vHippo)相关机制.方法:将 32只成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为 4组,分别为生理盐水对照组、EtOHWI模型组、Eptl低剂量治疗组和Eptl高剂量治疗组,每组各8只.EtOHWI模型组、Eptl低、高剂量治疗组每天 1次腹腔注射 3 g/kg乙醇(Ethanol,EtOH),连续 28 d,戒断 3d制备大鼠EtOHWI模型,生理盐水对照组腹腔注射等容积生理盐水.在 3d戒断期间,Eptl低、高剂量治疗组分别每天 1次灌胃 10和 30 mg/kg Eptl,第 3次给药 30 min后,利用旷场(Open filed,OF)和高架十字迷宫(Elevated plus maze,EPM)实验对各组大鼠进行焦虑样行为学检测.利用 ELISA检测血清皮质酮(Coritosterone,CORT)浓度、vHippo组织中GABA水平;利用实时荧光定量PCR检测vHippo组织中谷氨酸脱羧酶 67(GAD 67)mRNA相对表达量;利用 Western blot(WB)检测 vHippo组织中 GABAaRα1(GABAa receptor α1,GABAaRα1)、GABAaRα2、核因子E2相关因子 2(Nrf2)、血红素加氧酶 1(HO-1)蛋白表达;利用试剂盒检测vHippo组织中MDA、T-SOD、CAT、GSH以及IL-6和TNF-α的含量.利用免疫荧光检测技术观察HT22细胞的核中Nrf2蛋白水平.结果:与EtOHWI模型组相比,Eptl低、高剂量治疗组大鼠在OF中央区活动距离极显著升高(P<0.01),分别为 70.62%和 124.21%,活动时间显著升高(P<0.05或P<0.01),分别为251.75%和 371.62%,EPM的开放臂进入次数百分比显著升高(P<0.05或 P<0.01),分别为 110.33%和207.32%,滞留时间百分比显著升高(P<0.05或P<0.01),分别为 99.56%和 184.18%;血清CORT含量极显著降低(P<0.01);vHippo组织中GABA含量和GAD67mRNA表达显著升高(P<0.05或P<0.01);GABAaRα1、GABAaRα2、Nrf2和HO-1蛋白表达显著增多(P<0.05或P<0.01);MDA水平极显著降低(P<0.01),而T-SOD、CAT和GSH的活性或水平显著升高(P<0.05或P<0.01);IL-6、TNF-α含量显著降低(P<0.05或P<0.01).体外实验结果显示,与空白对照组相比,200 μmol/L H2O2 刺激的HT22细胞核中Nrf2的水平极显著增多(P<0.01),但 30 μmol/L Eptl预处理显著抑制了Nrf2水平的增多(P<0.05).结论:Eptl具有改善大鼠EtOHWI焦虑样行为的作用,其机制可能通过Eptl的抗氧化和抗炎作用而调节EtOHWI大鼠vHippo的GABAaR传递紊乱所介导.