巴戟天对骨关节炎小鼠软骨细胞自噬、凋亡的影响及机制

目的 探讨巴戟天对骨关节炎小鼠软骨细胞自噬、凋亡的影响及机制.方法 将40 只健康C57BL/6 雄性小鼠随机分为对照组、模型组、低剂量巴戟天组、中剂量巴戟天组及高剂量巴戟天组,每组 8 只.模型组和低、中、高剂量巴戟天组小鼠建立骨关节炎模型,随后模型组小鼠每日给予 1mL生理盐水灌胃,低、中、高剂量巴戟天组小鼠每日分别将 100、200、400 mg·kg-1 巴戟天溶于 1mL生理盐水灌胃,均持续4 周;对照组小鼠制备骨关节炎假模型,随后每日给予 1mL生理盐水灌胃,持续4 周.处死各组小鼠,无菌条件下提取右侧膝关节软骨组织,并制备软骨细胞悬液.原位末端转移酶标记染色检测各组小鼠软骨组织中软骨细胞凋亡率,流式细胞术检测各组小鼠软骨细胞悬液中软骨细胞的凋亡情况,Western blot法检测各组小鼠软骨细胞悬液中磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(p-PI3K)、自噬效应蛋白 1(Beclin1)、人微管相关蛋白轻链3B(LC3B)蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链反应法检测各组小鼠软骨细胞悬液中p-PI3K、p-Akt mRNA的表达.结果 模型组和低、中、高剂量巴戟天组小鼠软骨组织中软骨细胞凋亡率显著高于对照组(P＜0.05);低、中、高剂量巴戟天组小鼠软骨组织中软骨细胞凋亡率显著低于模型组(P＜0.05);中、高剂量巴戟天组小鼠软骨组织中软骨细胞凋亡率显著低于低剂量巴戟天组(P＜0.05);高剂量巴戟天组小鼠软骨组织中软骨细胞凋亡率显著低于中剂量巴戟天组(P＜0.05).模型组和低、中、高剂量巴戟天组小鼠软骨细胞悬液中软骨细胞凋亡率显著高于对照组(P＜0.05);低、中、高剂量巴戟天组小鼠软骨细胞悬液中软骨细胞凋亡率显著低于模型组(P＜0.05);中、高剂量巴戟天组小鼠软骨细胞悬液中软骨细胞凋亡率显著低于低剂量巴戟天组(P＜0.05);高剂量巴戟天组小鼠软骨细胞悬液中软骨细胞凋亡率显著低于中剂量巴戟天组(P＜0.05).模型组和低、中剂量巴戟天组小鼠软骨细胞悬液中Beclin1、LC3B、p-PI3K、p-Akt蛋白相对表达量及p-PI3K mRNA、p-Akt mRNA相对表达量显著低于对照组(P＜0.05);高剂量巴戟天组与对照组小鼠软骨细胞悬液中Beclin1、LC3B、p-PI3K、p-Akt蛋白相对表达量及p-PI3K mRNA、p-Akt mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(P＞0.05);低、中、高剂量巴戟天组小鼠软骨细胞悬液中Beclin1、LC3B、p-PI3K、p-Akt蛋白相对表达量及p-PI3K mRNA、p-Akt mRNA相对表达量显著高于模型组(P＜0.05);中、高剂量巴戟天组小鼠软骨细胞悬液中Beclin1、LC3B、p-PI3K、p-Akt蛋白相对表达量及p-PI3K mRNA、p-Akt mRNA相对表达量显著高于低剂量巴戟天组(P＜0.05);高剂量巴戟天组小鼠软骨细胞悬液中Beclin1、LC3B、p-PI3K、p-Akt蛋白相对表达量及 p-PI3K mRNA、p-Akt mRNA 相对表达量显著高于中剂量巴戟天组(P＜0.05).结论 巴戟天能通过调控PI3K/Akt信号通路促进骨关节炎小鼠软骨细胞的自噬,抑制软骨细胞凋亡.