产前他克莫司治疗对先天性膈疝大鼠病理模型肺血管重构的影响

目的:探讨产前对合并肺发育不良及肺动脉高压(PAH)的先天性膈疝(CDH)大鼠病理模型，采取他克莫司(FK506)治疗的抗血管重构作用及其作用机制。方法:选取17只健康、成年的无特定病原体(SPF)级Sprague Dawley(SD)大鼠为研究对象，均为8周龄，雌、雄鼠分别为12、5只。采用除草醚构建CDH大鼠病理模型。12只雌鼠受孕后，通过随机数字表法，根据不同处理方式处理分为FK506组(n＝3)、CDH组(n＝3)、CDH+FK506组(n＝3)和对照组(n＝3)。观察4组胎鼠肺组织发育情况，采取血管弹性纤维染色(EVG)，观察肺血管厚度；α-SMA和CD31免疫荧光双重染色，检测胎鼠新生血管生成；Western blotting法检测胎鼠肺组织中BMPR2、p-SAMD1、p-SMAD5蛋白的表达水平。本动物实验均经电子科技大学附属医院·四川省人民医院动物实验伦理委员会伦理审查通过[伦审(研)2022年第191号]。结果:①4组胎鼠的双肺重量和双肺重量/胎鼠体重总体比较，差异均有统计学意义(H＝81.25、106.98，P均<0.001)，而4组胎鼠体重总体比较，差异无统计学意义(P>0.05)。②EVG染色结果显示，4组胎鼠肺动脉中膜厚度百分比(MT%)和肺泡面积百分比(S%)总体比较，差异均有统计学意义(F＝13.26、P＝0.006，F＝37.48、P<0.001)。其中，CDH组胎鼠MT%，较对照组增厚(P＝0.001)；CDH+FK506组大鼠肺动脉MT%，则较CDH组降低(P＝0.002)。③4组CDH胎鼠α-SMA和CD31阳性细胞增殖指数分别总体比较，差异均有统计学意义(F＝33.76、9.18，P<0.05)。进一步进行4组间两两多重比较的结果显示，CDH组分别和CDH+FK506组、对照组组间比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。④FK506组、CDH+FK506组和对照组3组胎鼠BMPR2、p-SMAD1蛋白相对表达水平总体比较，差异均有统计学意义(F＝11.45、10.94，P<0.05)，而3组胎鼠p-SMAD5蛋白相对表达水平总体比较，差异无统计学意义(F＝0.01、P>0.05)。其中，CDH组胎鼠BMPR2、p-SMAD1表达水平，较对照组降低(P＝0.049、0.018)，CDH+FK506组BMPR2、p-SMAD1表达水平，则较CDH组升高(P＝0.010、0.023)。结论:在除草醚诱导的CDH大鼠病理模型中，产前对其采取FK506干预，可以减轻CDH大鼠模型的肺血管重构，对缓解CDH大鼠的肺发育不良具有正面影响。