猪TRIM56全长及其截短体真核表达质粒的构建及蛋白的表达和定位
Shandong Agricultural Sciences（2023）
Abstract
本研究构建了猪TRIM56(sTRIM56)全长及其截短体的真核表达质粒,并检测了其融合蛋白的表达和定位.首先,根据sTRIM56基因序列及结构特点,设计扩增全长及4个截短体的引物,提取猪肺泡巨噬细胞3D4/21的总RNA,RT-PCR扩增sTRIM56全长及截短体基因,并将其克隆至pXJ41真核表达载体,构建全长及其截短体的真核表达质粒.其次,将sTRIM56全长及截短体真核表达质粒转染HEK-293T细胞,Western blotting检测其蛋白表达;转染猪肺泡巨噬细胞3D4/21,间接免疫荧光试验(IFA)检测其亚细胞定位.双酶切和测序结果显示,sTRIM56全长及截短体的真核表达质粒构建成功;sTRIM56蛋白约为82 kDa,与预期相符,各截短体蛋白条带也与预期相符;sTRIM56全长及4个截短体蛋白均主要定位于细胞质中.本研究结果可为后续深入研究sTRIM56蛋白及其不同结构域的抗病毒作用及分子机制奠定基础.
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Key words
Swine TRIM56,Truncations,Eukaryotic expression plasmids,Expression,Localization
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