猪巴氏杆菌和波氏杆菌双重PCR检测方法的建立

本文旨在建立一种针对猪巴氏杆菌和波氏杆菌的特异、高效的双重 PCR 检测方法并应用于临床样品检测.根据巴氏杆菌和波氏杆菌保守序列 16S rRNA基因为靶基因,应用Primer 3.0 Plus软件设计了 2 对引物,在此基础上建立并优化双重 PCR反应体系.结果显示,该双重 PCR检测方法能有效扩增出猪巴氏杆菌和波氏杆菌的 172 和 519 bp的特异性片段,PCR扩增产物测序结果为目标片段;对副猪嗜血杆菌、产气荚膜梭菌、大肠埃希菌、沙门氏菌、链球菌的扩增结果均为阴性.将该方法应用于临床样品检测,对 63 例呼吸道症状的病猪的鼻拭子和肺脏进行细菌分离,其中 10 份样品检测出巴氏杆菌,8 份样品检测出波氏杆菌,2 份为巴氏杆菌和波氏杆菌混合感染,与已报道的 PCR检测方法符合率为 100%.表明该研究建立的双重 PCR 体系可为临床猪巴氏杆菌、波氏杆菌及混合感染提供一种灵敏且高效的检测方法.