miR-502调控犬乳腺肿瘤细胞增殖、迁移和EMT的作用机制

旨在探讨微小RNA-502(microRNA-502/miR-502)靶向RNA结合基序单链相互作用蛋白1(RNA-bind-ing motif,single-stranded-interacting protein 1,RBMS1)对犬乳腺肿瘤细胞增殖、迁移、上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响及其作用机制.通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测犬乳腺肿瘤细胞(CHMp和CHMm)和正常乳腺组织中miR-502和RBMS1的转录水平;利用脂质体转染法将miR-502 模拟物(mimic)、抑制剂(inhibitor)、阴性对照(negative control,NC)分别转染至犬乳腺肿瘤CHMm和CHMp细胞,用qRT-PCR方法检测细胞中miR-502 的表达水平,以 MTT法和Transwell试验分别检测细胞的增殖和迁移能力;通过qRT-PCR和 Western blot方法检测转染miR-502后对上皮细胞标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、间质细胞标志物波形蛋白(vimentin)、细胞迁移标志物基质金属蛋白酶(MMP2)、增殖标志物增殖细胞核抗原(PCNA)mRNA和蛋白表达水平;利用qRT-PCR和双荧光素酶报告试验验证miR-502与RBMS1基因的靶向关系.结果显示:与正常乳腺组织组相比,miR-502在犬乳腺肿瘤细胞中表达显著上调,RBMS1在犬乳腺肿瘤细胞中转录下调;转染miR-502 mimic后miR-502的转录水平显著高于miR-NC组,反之转染miR-502 inhibitor后miR-502的转录水平显著下调;与miR-NC组相比,转染miR-502 mimic显著促进犬乳腺肿瘤细胞的增殖和迁移,抑制E-cadherin mR-NA和蛋白的表达,促进vimentin、MMP2、PCNA mRNA和蛋白表达水平升高;反之,转染miR-502 inhibitor可显著抑制犬乳腺肿瘤细胞的增殖和迁移,促进E-cadherin mRNA和蛋白表达升高,降低vimentin、MMP2、PCNA mRNA和蛋白表达水平;qRT-PCR和荧光素酶报告试验显示,miR-502通过靶向RBMS1 3'-UTR抑制RBMS1 mRNA的表达.上述结果提示,miR-502在犬乳腺肿瘤细胞中高表达,干扰 miR-502的表达可以影响犬乳腺肿瘤CHMm细胞的增殖、迁移及EMT,且miR-502靶向调控RBMS1 mRNA的表达.