重组人干扰素α-2b反相层析分离纯化工艺的研究

2020版《中国药典》对重组人干扰素α-2b提出了新的质量标准,增加了相关蛋白的分析检测并明确了含量上限.而相关蛋白的结构与重组人干扰素α-2b的结构仅有微小差别,现有的常规分离方法难以去除.研究建立了重组人干扰素α-2b的反相层析纯化工艺,实现了重组人干扰素α-2b与其相关蛋白的分离.筛选和优化了反相层析填料、洗脱液乙腈浓度及上样量,确定了反相层析分离纯化工艺,包括层析填料:HPLCONE-10C18C3(300 Å,10 μm);洗脱条件:0.1％TFA-48％乙腈水溶液等度洗脱;上样量:不超过柱体积的1.6倍;检测波长210 nm.中试放大结果表明制备得到的重组人干扰素α-2b原液符合2020版《中国药典》的质量标准,原液活性高,纯度大于99％.该工艺分离效果好、成本低、工艺过程简单、易于大规模生产,为干扰素和其他生物大分子药物的生产企业提供了有价值的参考.