FOXP3调控非小细胞肺癌A549细胞对阿霉素敏感性的作用及其机制

目的:探讨叉头蛋白3(FOXP3)基因沉默后非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞对阿霉素(Dox)敏感性的变化,阐明其参与Dox耐药的机制.方法:采用脂质体法将FOXP3小干扰RNA(siRNA)片段转染至人NSCLC A549细胞,细胞分为空白对照组(不转染)、si-NC组(转染对照siRNA)和si-FOXP3组(转染FOXP3-siRNA).采用 Western blotting 法和免疫荧光法检测各组A549细胞中FOXP3蛋白表达水平,CCK-8法检测各组A549细胞增殖活性和半数抑制浓度(IC50)值.各组A549细胞中分别加入 0、10和20 μmol·L-1 DAPT,作为 0、10和20 μmol·L-1 DAPT组;另取A549 细胞,分别加入 0 μmol·L-1 DAPT、1.0 mg·L-1 Dox和 1.0 mg·L-1 Dox联合 10 μmol·L-1 DAPT,作为 0 μmol·L-1 DAPT组、1.0 mg·L-1 Dox组和 1.0 mg·L-1 Dox联合 10 μmol·L-1 DAPT组.Western blotting法检测各组细胞中Notch1、Hes1 和FOXP3 蛋白表达水平,CCK-8 和Western blotting法检测0、10和20 μmol·L-1 DAPT组A549细胞的IC50值和细胞中Notch1、Hes1及FOXP3蛋白表达水平,Western blotting法检测0 μmol·L-1 DAPT组、1.0 mg·L-1 Dox组和1.0 mg·L-1 Dox联合 10 μmol·L-1 DAPT组A549细胞中FOXP3、P-糖蛋白(P-gp)、Notch1 和 Hes1 蛋白表达水平.结果:与空白对照和si-NC组比较,si-FOXP3组A549细胞中FOXP3蛋白表达水平明显降低(P<0.01),增殖活性和IC50值降低(P<0.05或P<0.01),细胞中Notch1、Hes1和FOXP3蛋白表达水平明显降低(P<0.01).与 0 μmol·L-1 DAPT 组比较,10 和 20 μmol·L-1 DAPT 组 A549 细胞中Notch1、Hes1 和 FOXP3 蛋白表达水平明显降低(P<0.01).与 0 μ mol·L-1 DAPT 组比较,1.0 mg·L-1 Dox组A549细胞中FOXP3、P-gp、Notch1和Hes1蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与 1.0 mg·L-1 Dox组比较,1.0 mg·L-1 Dox联合 10 μmol·L-1 DAPT组A549细胞中FOXP3、P-gp、Notch1和Hes1蛋白表达水平明显降低(P<0.01).结论:沉默FOXP3可提高NSCLC细胞对Dox的敏感性,其作用机制与抑制Notch1/Hes1信号通路有关.