参苓白术散调控TLR4/NF-κB通路抑制LPS诱导心肌细胞炎性损伤的机制

目的 基于Toll样受体 4(Toll-like receptor 4,TLR4)/核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路探讨参苓白术散含药血清对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导H9C2心肌细胞炎性损伤的调控机制.方法 将分化完全的H9C2心肌细胞分为空白血清组、模型组、参苓白术散含药血清组、TLR4抑制剂(TAK-242)组,每组6个复孔.除空白血清组外,其余各组以10 μg·mL-1 LPS处理细胞,构建心肌细胞炎症损伤体外模型.空白血清组、模型组及TAK-242组以 10%空白血清进行培养,参苓白术散含药血清组用 10%含药血清培养,均培养 24 h.采用CCK-8 法测定各组细胞增殖情况;采用ELISA法及免疫荧光法检测细胞白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量及蛋白表达水平;采用Western blot法检测TLR4、NF-κB、NF-κB抑制蛋白α(degradation of protein κB-α,IκBα)蛋白表达情况.结果 CCK-8法结果发现,10%参苓白术散含药血清对细胞增殖无抑制作用.与空白血清组比较,模型组细胞的TNF-α、IL-1β含量及荧光表达量明显增高(P＜0.01),TLR4、NF-κB、Iκ-Bα蛋白表达明显上调(P＜0.01).与模型组比较,参苓白术散含药血清组IL-1β、TNF-α含量显著降低(P＜0.01),TLR4、NF-κB、IκBα蛋白表达明显下调(P＜0.01).结论 参苓白术散含药血清能抑制LPS诱导的心肌细胞炎性反应,其作用机制可能与调控TLR4/NF-κB通路,下调细胞炎症因子TNF-α、IL-1β表达有关.