肝豆汤调控NLRP3炎症小体抑制Wilson病模型神经炎症的机制研究

目的 通过观察肝豆汤对Nod样受体家族含pyrin结构域蛋白3(Nod-like receptor family,pyrin domain-containing protein 3,NLRP3)炎症小体的调控作用,探究其抑制Wilson病(Wilson's disease,WD)模型神经细胞炎症损伤的机制.方法 体外实验中,采用CuCl2诱导小胶质细胞(BV-2细胞)复制WD神经细胞损伤模型,并将BV-2细胞与海马细胞(HT-22细胞)条件培养,给予不同浓度肝豆汤含药血清.CCK-8法检测BV-2细胞及HT-22细胞活力,酶联免疫吸附法测定炎症因子水平,细胞化学法检测HT-22细胞乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)漏出水平及氧化应激水平,Western blot法检测NLRP3炎症小体相关蛋白表达水平.体内实验中,以TX小鼠为模型组,并以DL小鼠为正常组,肝豆汤组给予TX小鼠肝豆汤灌胃4周.采用Barnes迷宫、旷场实验、高架十字实验观察小鼠行为,苏木精—伊红染色法观察小鼠海马组织的损伤程度,Western blot法检测NLRP3炎症小体相关蛋白表达水平.结果 体外实验结果显示,与模型组比较,肝豆汤可抑制小胶质细胞活化,增加HT-22细胞的存活率(P<0.05),显著降低CuCl2诱导的HT-22细胞LDH漏出水平及氧化应激水平(P<0.05),抑制CuCl2诱导的BV-2细胞炎症因子分泌(P<0.05),降低半胱氨酸天冬氨酸酶1、NLRP3、白细胞介素-1β、含CARD结构域的凋亡相关颗粒样蛋白表达水平(P<0.05).体内实验研究发现,肝豆汤可减轻WD病模型TX小鼠海马组织神经细胞损伤,改善行为学异常(P<0.05),抑制TX小鼠海马组织NLRP3炎症小体相关分子表达水平(P<0.05).结论 肝豆汤通过抑制铜蓄积诱导的NLRP3炎症小体活化,减轻WD模型神经细胞炎症损伤.