CTA1-DD蛋白在枯草芽胞杆菌中的分泌表达

有研究证实,霍乱毒素(CT)A1 亚基与葡萄球菌G蛋白的D肽偶联构建的融合蛋白CTA1-DD具有良好的佐剂效果.为了获得重组CTA1-DD蛋白在枯草芽胞杆菌中的表达,将CTA1-DD基因连接到表达载体pHT43 中,构建重组枯草杆菌表达载体pHT43-CTA1-DD.将重组载体转化到枯草芽胞杆菌WB600 中,用IPTG诱导重组菌表达,发酵液离心后取上清液,通过SDS-PAGE和Western blot方法分析蛋白表达情况.发酵上清液经Ni-IDA琼脂糖树脂纯化,与流感病毒HA抗原混合后共同滴鼻免疫小鼠后采集小鼠血清和支气管肺泡灌洗液检测IgG和IgA的抗体水平.结果显示:重组CTA1-DD蛋白在枯草芽胞杆菌中能够分泌表达,在发酵罐中发酵36h情况下蛋白表达量最高,目的蛋白大小在42 kDa左右,蛋白产量最高能到700 μg/mL,Western blot检测目的蛋白正确表达.重组蛋白经过Ni-IDA琼脂亲和层析纯化后与HA抗原混和滴鼻免疫小鼠,ELISA结果显示CTA1-DD蛋白组针对HA抗原能够诱导更高的血清IgG和黏膜IgA抗体水平,说明枯草芽胞杆菌表达的CTA1-DD蛋白具有佐剂活性.试验结果为进一步研究CTA1-DD蛋白在黏膜佐剂的大规模生产应用奠定了基础.