非洲猪瘟病毒B602L蛋白的真核表达及多克隆抗体的制备
Chinese Journal of Veterinary Drug（2023）
Abstract
为表达非洲猪瘟病毒B602L重组蛋白,制备相应的多克隆抗体,根据NCBI网站上公布的非洲猪瘟病毒(Pig/HLJ/2018 株)B602L基因序列进行密码子优化和基因合成,随后克隆至杆状病毒转移载体pFastBac1 中,获得重组杆状病毒质粒,再把重组杆粒转染昆虫细胞Sf9,拯救重组B602L基因的杆状病毒.经间接免疫荧光和western blots鉴定结果显示,B602L重组蛋白与His标签抗体、非洲猪瘟标准阳性血清均能发生特异性反应,并且B602L重组蛋白可以细胞分泌上清的形式进行表达.通过His镍株亲和纯化的方式纯化重组蛋白,B602L蛋白大小约 70 ku,与预期相符.将B602L重组蛋白与弗氏佐剂配比免疫BALB/c小鼠,制备小鼠多克隆抗体,经间接ELISA检测,该抗体效价可达1∶512000,并且与B602L重组蛋白具有良好的反应性.本研究可为进一步研究非洲猪瘟B602L蛋白的结构与功能、研制非洲猪瘟诊断制品提供生物材料.
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African swine fever virus,B602L,eukaryotic expression,polyclonal antibody
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