透明质酸修饰纳米粒在超声-微泡介导下的体外靶向性与安全性评价

目的 制备一种由透明质酸修饰的纳米粒核酸递送载体(HDP@siRNA NPs),评价其生物安全性以及在超声-微泡介导下的体外转染靶向性.方法 采用超声乳化溶剂挥发联合两步静电吸附法制备得到HDP@siR-NA NPs,在透射电镜下观察其外观形态,测定其粒径、Zeta表面电位及体外稳定性,并检测siRNA的包封率及体外释放能力.荧光显微镜观察超声-微泡介导下纳米粒对肿瘤细胞的转染效果.通过CCK-8 实验以及小鼠定期给药后的血清生化指标[肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、肝脏的丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转移酶(AST)、肾脏的血清肌酐(CREA)、尿素氮(BUN)]检测及主要器官(心、肝、脾、肺、肾)病理切片分析验证纳米粒体内外生物安全性.结果 成功制备出HDP@siRNA NPs,其在透射电镜下为形态均一的三层球形结构,粒径为(154.71±2.91)nm,Zeta表面电位为(-14.12±1.67)mV,并可长期稳定保存.该纳米粒载体对siRNA的包封率为(77.05±2.28)%,体外释放实验显示其具有缓释效果.靶向纳米粒联合超声-微泡组转染细胞后,Cy3荧光强度量化值为单独siRNA组的 3.98 倍(P＜0.001),为非靶向NPs组的 1.71 倍(P＜0.001),为靶向NPs组的 1.39 倍(P＜0.001).CCK-8 结果显示,共孵育siRNA浓度为 100 nmol·L-1 及 150 nmol·L-1 时,HDP@siRNA NPs组细胞存活率依然维持在较高水平,并高于DP@siRNA NPs组(P＜0.001),同时加入SonoVue共孵育对细胞存活率未产生明显影响(P＞0.05).对健康小鼠定期注射纳米粒及SonoVue微泡期间,给药结束后的血清生化检测结果显示,三组小鼠心、肾、肝功能基本指标水平差异均无统计学意义(P均＞0.05),心、肾、肝未见异常损害情况.结论 成功制备的由透明质酸修饰的HDP@siRNA NPs具有较高的生物安全性,在超声-微泡介导下其转染细胞效率得到进一步提升,具备作为新型核酸递送载体的潜力.