葡萄VvGCN5基因的鉴定及互作蛋白筛选

[目的]本文旨在揭示组蛋白乙酰转移酶GCN5(general control non-repressible 5)在葡萄生长发育过程中的调控机制,并筛选出与VvGCN5 互作的蛋白,以期为进一步构建VvGCN5 在葡萄生长发育中的调控网络提供理论基础.[方法]利用生物信息学技术对VvGCN5 的蛋白二级结构、基因结构、功能域、启动子的顺式作用元件以及抗逆的表达量和时空表达进行分析,并在烟草中进行亚细胞定位,研究VvGCN5 表达位置.通过酵母双杂交技术筛选与VvGCN5 互作的蛋白,并通过双分子荧光互补(BIFC)技术进行验证.[结果]VvGCN5 的二级结构由α-螺旋、延伸链、β-折叠以及无规则卷曲构成,含有10 段内含子序列和 11 段CDS序列,具有Acetyltransf_1 和Bromodomain结构域,以及ARE、GT1-motif、TGACG-motif、CAT-box、CGTCA-motif等顺式作用元件.通过查询GEO数据库发现VvGCN5 可能受到光照和灰霉病的影响.VvGCN5 主要表达于葡萄的成熟茎、萌芽初期、心皮、种子中.亚细胞定位发现VvGCN5 位于细胞核和细胞膜上.此外,以pGBKT7-VvGCN5作为诱饵蛋白,通过酵母双杂交技术和双分子荧光互补技术发现 8 个阳性蛋白与VvGCN5 互作.[结论]本研究鉴定并分析了VvGCN5 的基本信息,并得到了 8 个与VvGCN5 互作的蛋白.