基于榛子过敏原2S albumin基因的实时荧光聚合酶链式反应检测方法开发

目的 开发一种基于 2S albumin 基因的实时荧光聚合酶链式反应检测方法(real-time fluorescent polymerase chain reaction,qPCR)用于检测食品中的榛子成分.方法 从美国国家生物技术信息中心数据库中检索并选取具有高特异性的榛子2S albumin基因序列的DNA片段进行引物探针设计,建立一种新的用于检测微量榛子成分的实时荧光PCR方法,并对建立的方法的特异性、扩增效率、检出限和稳健性进行验证.结果 本方法对检测目标呈现出高特异性,与其余 12 种非目标样品无交叉反应.扩增效率为 99.42%,相关系数 r2 为0.9941,两者均符合实时荧光PCR方法验证指南要求.该方法检出限(limit of detection,LOD)为每个反应 5 拷贝(2.5 copies/μL),可检测出食品中含有的微量榛子成分.使用正交实验设计评估该方法具有很好的稳健性(P=0.07),可转移到其他实验室及常规分析中使用.结论 基于 2S albumin基因组分的qPCR检测方法可用于识别食品中潜在的榛子成分,对于预防榛子过敏及开发减敏脱敏榛子食品研究具有很好的技术支撑.