Padronização da produção de controles de qualidade interno (cqi) dos testes de triagem molecular hiv, hcv e hbv em doadores de sangue

Objetivos: A triagem de doenças infecciosas transmitidas por transfusão é fundamental no processo de qualificação de hemocomponentes para uso terapêutico. O CQI é essencial no monitoramento deste processo, proporcionando precisão na análise crítica por ser baseado na realidade analítica. O objetivo deste estudo foi padronizar de forma sistematizada a produção “in house”de CQIs para os testes NAT (nucleic acid technology) qualitativos HIV, HCV e HBV, incluindo avaliação da reprodutibilidade e estabilidade da amostra. Métodos: Nesse estudo experimental foram utilizadas amostras de 2 unidades de Plasma Fresco Congelado (PFC) com resultados reagentes para cada um dos marcadores HIV, HCV e HBV (total 6U de PFC). Uma alíquota de cada PFC foi submetida a diluições seriadas até 1:1024 (diluente PFC negativo para HBV, HCV e HIV) e as amostras foram testadas em triplicata na Plataforma NAT HIV/HCV/HBV Bio-Manguinhos®. Identificada a maior diluição com resultado no teste NAT qualitativo repetidamente positivo nas 3 amostras de cada unidade de PFC, e selecionado para a produção de CQIs a amostra imediatamente anterior. No intuito de avaliar a reprodutibilidade, 20 alíquotas desta diluição (totalizando 40 de cada marcador HIV, HBV, HCV) foram re testadas na mesma plataforma utilizando Kits de lotes distintos e amostras foram enviadas para quantificação da carga viral (CVi) no Laboratório de AIDS-HC Unicamp (Abbot Realtime®HBV, HCV e HIV). Os resultados de CT (Cycle Threshold), DP(Desvio Padrão) e CV (Coeficiente de variação) foram analisados. Adicionalmente, 6 alíquotas (1 de cada PFC) foram submetidas a 20 ciclos de congelamento e descongelamento (TA e re congelamento por 24 horas) e posteriormente testadas na Plataforma NAT HIV/HCV/HBV Bio-Manguinhos® para avaliação da estabilidade da amostra. Resultados: A alíquota do PFC-HIV (bolsa 1) com diluição selecionada de 1:256 apresentou média de CT (mCT) nas 20 amostras analisadas de 34,5 (DP-0,8 ; CV-2,4; CVi-85.173 cópias/mL), enquanto o PFC HIV (bolsa 2) com diluição de 1:512 apresentou mCT 34,3 (DP-0,8; CV-2,4;CVi-83.353 cópias/mL). No PFC-HCV(1), foi obtido na diluição 1:32 mCT 28,0 (DP-0,5; CV-1,8; CVi-1.383.121 UI/mL) e no PFC-HCV(2), diluição 1:128 com mCT 32,5 (DP- 0,7; CV-2,38; CVi-271.630 UI/mL) e finalmente no PFC-HBV(1) a diluição 1:128 com mCT 34,8 (DP-0,4; CV:1,3, CVi-3.048 UI/mL) e PFC-HBV(2)1:128 com mCT de 35,8 (DP-1,32; CV-3,6, CVi-220 UI/mL). As amostras dos PFCs diluídas e submetidas a ciclos de congelamento e descongelamento permaneceram estáveis, não houve resultados falso-negativos e nem alterações significativas nos resultados do mCT. Conclusões: Os CQIs para o teste NAT, produzidos a partir de amostras de PFC positivas para HBV, HCV e HIV e diluídos em PFC, podem ser considerados uma opção viável para a rotina assistencial, as amostras apresentaram estabilidade e reprodutibilidade dos resultados. NºCAAE: 57413121.7.0000.5404.