烟草烟雾通过激活ROS/NLRP3信号通路加重Sertoli-生精细胞损伤研究
Acta Universitatis Medicinalis Anhui(2023)
摘要
目的 基于ROS/NLRP3信号通路探讨烟草烟雾暴露所致Sertoli-生精细胞损伤的作用机制.方法 体外培养大鼠Sertoli-生精细胞,分为对照组(A组)、烟草烟雾提取物(CSE)处理组(B组)和CSE+NLRP3炎症小体抑制剂MCC950组(C组).CCK-8法检测细胞存活率,乳酸脱氢酶(LDH)判断细胞膜受损情况,活性氧(ROS)判断氧化应激水平,Hoechst/PI双染检测细胞焦亡水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)测定NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NL-RP3)、凋亡相关微粒蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、消皮素 D(GSDMD)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)mRNA表达水平,Western blot检测细胞 NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD、IL-1 β和 IL-18 蛋白表达水平.结果 CSE组Sertoli-生精细胞存活率显著下降(P<0.001),LDH漏出率显著增加(P<0.001),ROS生成显著增加(P<0.001);与 CSE 组比较,CSE+MCC950 组 Sertoli-生精细胞存活率升高(P<0.001),LDH漏出率降低(P<0.01),ROS生成显著降低(P<0.001).对照组Sertoli-生精细胞仅见少量PI染色细胞,CSE组PI染色细胞明显增多,CSE+MCC950组PI染色细胞数量低于CSE组.RT-qPCR和 Western blot 结果显示,CSE 组 NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD、IL-1β和IL-18 mRNA和蛋白质表达水平均显著升高(P<0.001),CSE+MCC950组表达水平均显著降低(P<0.01).结论 烟草烟雾暴可导致Sertoli-生精细胞氧化应激和损伤,其机制可能与ROS/NLRP3信号通路激活有关.
更多关键词
cigarette smoke,NLRP3,ROS,pyroptosis,sertoli/spermatogenic cells
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