小儿健脾益肺方改善哮喘小鼠气道高反应的实验研究

目的 探讨小儿健脾益肺方通过高迁移率组蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体 4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)炎症信号通路改善哮喘小鼠气道高反应的作用机制.方法 60 只 SPF 级Balb/c小鼠随机数字表法分为空白组、模型组、布地奈德组、小儿健脾益肺方组、布地奈德+小儿健脾益肺方组,用卵清白蛋白(OVA)致敏、激发建立小鼠急性哮喘模型,分别予布地奈德(0.2g/L)、小儿健脾益肺方(1.875 g/kg)干预.肺功能检测气道阻力,支气管肺泡灌洗液吉姆萨染色检测小鼠各种细胞占比情况,肺组织切片HE及PAS染色观察,ELISA检测血清及支气管肺泡灌洗液中OVA-IgE、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,蛋白质印迹法及免疫荧光检测HMGB1、髓样分化因子 88(MyD88)、TLR4、p-NF-κB/NF-κB等通路蛋白表达情况.结果 与空白组比较,模型组气道阻力明显升高(P<0.01),支气管肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞比例明显升高(P<0.01),组织病理学染色较空白组出现明显炎性细胞浸润、杯状细胞增生、气道上皮水肿、管腔狭窄,血清及支气管肺泡灌洗液中OVA-IgE、IL-6、IL-1β、IFN-γ、TNF-α 表达升高(P<0.01),HMGB1、MyD88、TLR4、NF-κB等通路蛋白表达升高(P<0.05),NF-κB磷酸化程度升高(P<0.05).与模型组比较,布地奈德组、小儿健脾益肺方组、布地奈德+小儿健脾益肺方组气道阻力降低,支气管肺泡灌洗液中巨噬细胞占比升高、嗜酸性粒细胞降低(P<0.05),组织病理学染色结果显示炎症细胞浸润改善、平滑肌层增厚缓解、上皮完整性增加,杯状细胞化生减少,HE评分、PAS评分与模型组比较差异具有统计学意义(P<0.05).血清和支气管肺泡灌洗液中,小儿健脾益肺方组、布地奈德组、布地奈德+小儿健脾益肺方组与模型组比较均能明显降低各项指标的含量(P<0.01);与布地奈德组比较,小儿健脾益肺方组血清OVA-IgE含量明显升高(P<0.05),小儿健脾益肺方组和布地奈德+小儿健脾益肺方组HMGB1 含量明显降低(P<0.05).蛋白质印迹法检测结果显示,与模型组比较,小儿健脾益肺方组、布地奈德组、布地奈德+小儿健脾益肺方组均能有效降低HMGB1、MyD88 和TLR4 蛋白的表达和NF-κB的磷酸化程度,差异具有统计学意义(P<0.01);与布地奈德组相比,小儿健脾益肺方组HMGB1 的表达明显下降,而TLR4、MyD88 的表达升高,布地奈德+小儿健脾益肺方组HMGB1、TLR4、MyD88 的表达均明显下降,差异均具有统计学意义(P<0.05).免疫荧光检测结果显示,小儿健脾益肺方组、布地奈德组、布地奈德+小儿健脾益肺方组HMGB1 与模型组比较明显降低(P<0.01),布地奈德+小儿健脾益肺方组的HMGB1 和TLR4 较布地奈德组均明显降低(P<0.05).结论 小儿健脾益肺方和布地奈德均能有效缓解哮喘相关病理改变,降低炎症因子表达,抑制HMGB1/TLR4/NF-κB炎症信号通路,改善气道高反应.小儿健脾益肺方和布地奈德联合应用优于布地奈德单独应用.HMGB1/TLR4/NF-κB炎症信号通路是健脾益肺方改善儿童哮喘气道高反应性的潜在作用机制.