基于PI3 K/A kt信号通路探讨地龙蛋白改善糖尿病大鼠勃起功能障碍的作用机制

目的 通过检测磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路相关因子,探讨地龙蛋白对糖尿病性勃起功能障碍(DMED)大鼠的作用机制.方法 50只6～8周龄SPF级SD雄鼠通过腹腔注射链脲佐菌素(STZ)构建DMED大鼠模型,同时另取10只6～8周龄SPF级SD雄鼠作为空白组;造模成功后随机分组,西地拉非组给予西地拉非0.005 g/kg灌胃,地龙蛋白低、中、高剂量组分别给予0.045、0.090、0.180 g/kg地龙蛋白灌胃,正常组和模型组均给予生理盐水灌胃,各组10mL/kg,每日一次.给药4周后,测定大鼠阴茎海绵窦最大内压(ICPmax)和颈动脉压(MAP)以评估大鼠的勃起功能,原位末端标记法(Tunel)检测阴茎海绵体细胞凋亡率,马松(Masson)三色染色观察阴茎海绵体纤维化程度,蛋白免疫印迹法(Western blot)法测定阴茎海绵体中PI3K、Akt、磷酸化蛋白激酶B(pAkt)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)表达,实时荧光定量聚合酶链反应法(Real-time PCR)测定上述蛋白mRNA表达.结果 与空白组比较,模型组大鼠体质量、阴茎质量、阴茎指数、ICPmax、ICPmax/MAP、阴茎海绵体中PI3K、Akt、pAkt、Bcl-2蛋白及mRNA表达均明显降低(P＜0.01),细胞凋亡率、纤维化程度、Caspase-3蛋白及mRNA表达均明显升高(P＜0.01).与模型组比较,各治疗组大鼠体质量、阴茎质量、ICPmax、ICPmax/MAP、阴茎海绵体中P13K、Akt、pAkt、Bcl-2蛋白及mRNA表达均明显升高(P＜0.01),细胞凋亡率、纤维化程度、Caspase-3蛋白及mRNA表达均明显降低(P＜0.01).结论 地龙蛋白对DMED大鼠阴茎海绵体有保护作用,在一定程度上改善了阴茎勃起功能,抑制了阴茎海绵体细胞凋亡和纤维化,其机制可能是通过激活PI3K/Akt相关信号通路实现的.