丁酸钠通过TLR4/NF-κB信号通路调控脂多糖诱导的BV2小胶质细胞表型极化

目的 研究丁酸钠(sodium butyrate,NaB)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导 BV2 小胶质细胞炎症表型的调控作用和分子机制.方法 不同浓度NaB单独及联合LPS干预BV2细胞,采用CCK-8法检测BV2细胞活力的变化,根据结果选择实验浓度.将BV2小胶质细胞分为对照(Control)组、LPS组、LPS+NaB低剂量组(0.125 mmol/L)和LPS+NaB高剂量组(0.25 mmol/L);NaB预处理过夜(17 h)后,采用LPS继续孵育24 h诱导BV2小胶质细胞炎症模型;GRIESS法检测细胞NO释放量,ELISA检测细胞培养液中细胞因子IL-1β、TNF-α和IL-10的含量;RT-qPCR检测细胞iNOS和CD206 mRNA水平;免疫荧光染色法检测细胞iNOS和CD206的平均荧光强度;Western blot检测细胞中TLR4、NF-κB p65、IKB-α和p-IKB-α表达水平,分离胞浆和胞核蛋白,检测NF-κB p65的核转位.结果 GRIESS结果显示,高、低剂量NaB组的NO分泌水平较LPS组低(P＜0.05);ELISA结果显示,高、低剂量NaB组中的IL-1β和TNF-α分泌水平较LPS组低(P＜0.05),IL-10分泌水平较LPS组高(P＜0.05);RT-qPCR结果显示,高、低剂量NaB显著下调了iNOS mRNA的表达(P＜0.05),促进了CD206 mRNA的表达(P＜0.05);免疫荧光结果显示,高、低剂量NaB可显著减少BV2细胞M1表型标志物iNOS的表达,促进M2表型标志物CD206的表达(P＜0.05);Western blot结果显示,与LPS组相比,高、低剂量NaB显著抑制了TLR4、NF-κB p65和p-IKB-α的蛋白表达,同时抑制了NF-κB p65的核转位(P＜0.05).结论 NaB显著减轻LPS诱导的BV2细胞炎症反应,其机制可能与NaB抑制TLR4/NF-κB信号通路、促进BV2细胞由M1表型向M2表型极化有关.