葛根芩连汤调控MMP-9/p38 MARK途径修复溃疡性结肠炎小鼠肠黏膜上皮屏障功能

目的:探讨葛根芩连汤对溃疡性结肠炎(UC)小鼠肠黏膜上皮屏障功能的保护作用,并通过基质金属蛋白酶-9(MMP-9)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路探究其治疗UC的作用机制.方法:48只雌性C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、柳氮磺吡啶组(0.3 g·kg-1)及葛根芩连汤高、中、低剂量组(2.84,1.42,0.71 g·kg-1).采用3％葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液构建UC小鼠模型,葛根芩连汤和柳氮磺吡啶于造模后第8天灌胃给药,连续7 d,正常组给予等量生理盐水处理.末次给药后取结肠组织,苏木素-伊红(HE)染色观察结肠组织病理变化,免疫组化(IHC)观察结肠组织紧密连接(TJ)蛋白,如闭合蛋白(Occludin),闭锁连接蛋白-1(ZO-1)的表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测结肠组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β),MMP-9 mRNA表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结肠组织中磷酸化(p)-p38MAPK,p38MAPK和MMP-9蛋白的表达.结果:与正常组比较,模型组小鼠体质量显著下降(P＜0.01),疾病活动指数(DAI)评分显著升高(P＜0.01),结肠黏膜上皮破损并可见黏膜和黏膜下层炎细胞浸润明显,Occludin,ZO-1 蛋白表达显著降低(P＜0.0 1),TNF-α,IL-1β,MMP-9 mRNA 相对表达量显著升高(P＜0.01),p-p38 M APK 和 MMP-9蛋白表达显著升高(P＜0.01);与模型组比较,柳氮磺吡啶组、葛根芩连汤各剂量组小鼠体质量和DAI评分均有明显改善(P＜0.05,P＜0.01),结肠组织损坏明显改善,Occludin,ZO-1 蛋白明显增多(P＜0.05,P＜0.01),TNF-α,IL-1β,MMP-9 mRNA相对表达量显著下降(P＜0.01),p-p38 MAPK和MMP-9蛋白表达显著下降(P＜0.01),其中葛根芩连汤各组中以中剂量组的变化最为明显.结论:葛根芩连汤能够通过抑制MMP-9和炎性细胞因子TNF-α,IL-1β的表达,阻断p38 MAPK信号通路的激活,增加TJ蛋白的表达,从而修复肠道黏膜屏障功能.