青藤碱对人肝癌HepG2和SK-HEP-1细胞的抑制作用及分子机制研究

研究青藤碱(sinomenine)对人肝癌HepG2 细胞和SK-HEP-1 细胞的增殖、凋亡、转移以及与抑制剂联用的影响及分子机制研究.通过细胞增殖与活性检测(cell counting kit-8,CCK-8)实验、克隆形成实验、BeyoClickTM EdU-488 染色法探究青藤碱对人肝癌 HepG2 和 SK-HEP-1 细胞生长能力的影响.利用免疫荧光实验检测青藤碱对 DNA损伤的影响,采用 Hoechst 33258 染色法、CellEventTM 半胱天冬酶-3/7Green ReadyProbesTM 试剂法明确青藤碱对人肝癌细胞凋亡的影响.通过细胞侵袭实验和 3D肿瘤细胞球体侵袭实验研究青藤碱对人肝癌细胞体外侵袭能力的影响.借助Western blot检测青藤碱对人肝癌HepG2 和SK-HEP-1细胞中蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)/信号转导和转录激活因子 3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)信号通路相关蛋白表达水平的调控作用.运用分子对接的方法评判青藤碱与靶点含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,caspase-3)和STAT3 亲和力的强弱,并结合CCK-8法检测青藤碱与STAT3 抑制剂JSI-124 联用后细胞活力的变化.结果表明,青藤碱能够明显降低人肝癌细胞的细胞活力,且呈现浓度和时间依赖性;能够显著抑制人肝癌细胞的克隆形成能力,还能削弱人肝癌细胞的体外侵袭能力.此外,青藤碱能够上调人肝癌细胞中凋亡标志物多聚 ADP 核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)的剪切水平并下调p-Akt、p-mTOR和p-STAT3 的蛋白水平.分子对接结果显示,青藤碱对靶点caspase-3 和STAT3 具有良好的亲和力,且STAT3 被抑制后,青藤碱对肝癌细胞的敏感性被削弱.因此,青藤碱能够抑制人肝癌细胞的增殖和侵袭并诱导其发生凋亡,其作用机制可能与激活caspase-3信号和抑制Akt/mTOR/STAT3 通路有关.该研究能够为青藤碱的深入研究和临床应用提供新的参考,对进一步推动青藤碱的科学开发利用具有重要意义.