驴Zfy基因干扰载体的构建及验证

目的 探讨干扰驴 Zfy基因的体内外干扰效果.方法 根据驴Zfy基因设计合成 4 段shRNA,并由独立的U6 启动子启动,每两个shRNA片段串联组合成干扰载体,体外培养生精细胞检测干扰载体的干扰效率,筛选最佳的干扰载体用于体内验证干扰效果.结果 结果显示:构建出 2 个驴 Zfy 基因双 shRNA 串联重组干扰载体 CV250-1、CV250-2,细胞水平验证结果表明 CV250-1 的干扰效率为 76.37%±6.36%,差异极显著(P<0.01);CV250-2 的干扰效率为 67.73%±4.94%,差异显著(P<0.05).成功对 CV250-1 重组载体进行体内验证,经母体静脉血胎儿游离DNA性别鉴定得到胎儿雌性率为 71.05%(P<0.05).结论 成功构建的驴Zfy基因重组载体CV250-1,可抑制种公驴睾丸组织 Zfy基因的表达,细胞水平干扰效率为 76.37%,体内试验胎儿雌性率为 71.05%,差异显著(P<0.05).