液相色谱串联质谱法检测血浆12种神经酰胺方法建立与性能评价

目的:建立一种稳定、灵敏的液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）检测人血浆12种神经酰胺方法。方法:收集2021年10月至2022年10月在遵义医科大学及其各附属医院健康体检的438名表观健康人群，建立12种神经酰胺生物参考区间。采用氘代同位素作为内标，使用ACQUITY UPLC BEH C18（2.1 mm×50 mm，1.7 μm）色谱柱进行分离，流动相为水（含0.1%甲酸）和异丙醇：乙腈（1∶1，v/v，含0.1%甲酸），流速0.4 ml/min，梯度洗脱。使用Qlife Lab 9000 Plus三重四极杆质谱建立LC-MS/MS检测12种神经酰胺的方法。并从线性、定量下限、精密度、回收率和稳定性几个方面对该方法进行性能评价。结果:该方法通过了线性、定量下限、回收率、精密度、稳定性的性能评价。12种神经酰胺批内和批间精密度为1.3%~14.3%，正确度通过加标回收实验验证，回收率在91.9%~111.0%，最低定量下限范围为0.001~0.100 μmol/L，标准曲线显示出良好的线性关系（ r>0.990），稳定性实验显示12种神经酰胺在生物基质中及不同条件处理后规定时间内稳定。12种神经酰胺建立了各自相应的生物参考区间，分别为0.103~0.326 μmol/L［Cer（d18∶1/16∶0）］、0.018~0.098 μmol/L［Cer（d18∶1/18∶0）］、0.933~3.919 μmol/L［Cer（d18∶1/24∶0）］、0.243~1.072 μmol/L［Cer（d18∶1/24∶1）］、0.001~0.007 μmol/L［Cer（d18∶1/14∶0）］、0.022~0.095 μmol/L［Cer（d18∶1/20∶0）］、0.185~0.835 μmol/L［Cer（d18∶1/22∶0）］、0.003~0.022 μmol/L［Cer（d18∶0/16∶0）］、0.001~0.016 μmol/L［Cer（d18∶0/18∶0）］、0.017~0.156 μmol/L［Cer（d18∶0/24∶0）］、0.008~0.074 μmol/L［Cer（d18∶0/24∶1）］、0.106~0.721 μmol/L［LacCer（d18∶1/24∶1）］。 结论:本研究建立了可靠的检测人血浆12种神经酰胺的LC-MS/MS检测方法，适合于临床应用。