小鼠细小病毒VP2蛋白在昆虫细胞-杆状病毒系统中的表达和免疫原性分析

目的 利用杆状病毒表达系统合成重组小鼠细小病毒(MVM)VP2 蛋白,并对其免疫原性分析.方法 将优化后的 MVM VP2 序列克隆至表达载体 pFastBac1,命名为 pFastBac1-MVM VP2,再将其转化至 DH10Bac 感受态大肠杆菌中形成重组杆粒,提取重组杆粒经PCR鉴定正确后转染昆虫细胞Sf9,镜下观察到细胞明显病变后收获重组杆状病毒 rBac-MVM VP2.Sf9 细胞接重组病毒 48 和 72 h 后,用间接免疫荧光(IFA)和蛋白免疫印迹(Western blot)法验证重组蛋白的免疫原性.结果 构建的 rBac-MVM VP2 重组杆状病毒感染 Sf9 细胞后,可成功表达 MVM VP2 重组蛋白,经 Western blot和 IFA检测分析,重组蛋白具有较好的免疫原性且在病毒感染 72 h 时表达量较高.经蛋白纯化后可得到纯度较高的 VP2 重组蛋白.结论 本研究利用昆虫细胞-杆状病毒系统成功表达 MVM VP2蛋白并具有良好的免疫原性,为 VP2 相关功能的研究和临床诊断方法的建立奠定基础.