褪黑素通过上调泛醌—细胞色素C还原酶核心蛋白1抑制MPP+诱导的MN9D细胞凋亡和线粒体损伤

目的 探讨褪黑素(melatonin,MT)在1-甲基-4-苯基-吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium ion,MPP+)诱导的帕金森病体外模型中的作用及分子机制.方法 将MN9D细胞分为对照组、MPP+组、MT组、治疗组.采用细胞计数试剂盒8检测MT和MPP+对细胞活力的影响;采用线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)评价线粒体功能;Hoechst/PI双染法检测细胞凋亡;通过免疫荧光蛋白质印迹法(Western blotting)检测凋亡相关蛋白[Cleaved-Caspase 3和细胞色素C(cytochrome C,CytC)]以及泛醌—细胞色素C还原酶核心蛋白 1(ubiquinol-cytochrome C reductase core protein 1,UQCRC1)蛋白的表达;采用干扰 RNA 技术沉默 MN9D 细胞中 UQCRC1的表达,然后采用Western blotting检测凋亡相关蛋白表达.结果 MT可以减轻MPP+诱导的细胞活力下降(P＜0.05);恢复MPP+造成的线粒体膜电位下降(P＜0.05);减少MPP+诱导的凋亡细胞数量(P＜0.05);抑制凋亡蛋白(CytC和Cleaved-Caspase3)的表达(P＜0.05);上调UQCRC1的表达(P＜0.05).沉默UQCRC1后,MT组和治疗组的UQCRC1表达均下降(P＜0.05);MT对MPP+诱导细胞凋亡的保护作用下降(P＜0.05);凋亡蛋白(CytC和Cleaved-Caspase3)的表达增加(P＜0.05).结论 MT对MPP+诱导的多巴胺能神经元损伤具有保护作用,其机制可能是通过上调UQCRC1抑制神经元凋亡.