菟丝子黄酮对H2O2诱导的COV434人卵巢颗粒细胞氧化应激的影响

目的 研究菟丝子黄酮(flavonoid from semen cuscutae,FSC)对过氧化氢(H2O2)诱导的人卵巢颗粒细胞氧化应激的影响以及可能相关的作用机制.方法 使用不同浓度H2O2 处理人卵巢颗粒细胞(COV434)2 h,用CCK-8检测法评估细胞增殖活力,以确定构建细胞外氧化应激模型的H2O2刺激浓度;检测不同浓度的FSC对细胞的毒性作用;使用25 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL、200 μg/mL、400 μg/mL的FSC处理氧化应激模型组细胞,CCK-8法检测FSC对细胞增殖活力的影响.根据处理条件将细胞分为四组:Control组,FSC组,H2O2 组,FSC+H2O2 组,使用CCK-8检测细胞增殖率,活性氧(ROS)试剂盒测定细胞内ROS含量,采用Western blot测定AMPK、P-AMPK、Bax和P53蛋白的表达量.结果 0.5 mmol/L的H2O2处理2h为构建COV434细胞氧化应激模型最佳条件.同时,100 μg/mL FSC处理24h为最佳预处理条件.H2O2处理后细胞增殖活力下降,ROS水平上升,FSC处理可以降低ROS水平.Western Blot结果表明,H2O2处理后P-AMPK蛋白表达下调,P53和Bax表达升高,而FSC可以逆转这一趋势.结论 H2O2可能通过抑制AMPK通路进而影响下游P53、Bax的表达,FSC可逆转H2O2所致的COV434细胞氧化损伤这一作用.